总抗氧化能力(T-AOC)检测试剂盒(A015-2)

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

[预期应用] 

本试剂盒利用ABTS法测血清、血浆、组织匀浆,细胞,细胞上清中总抗氧化能力(T-AOC)。


[试剂盒内容]

试剂

数量(100T)

试剂

数量(100T)

Reagent 1

1×20ml

Reagent 4

1×0.2ml

Reagent 2

1×1ml

Reagent 5

1×0.1ml

Reagent 3

1×0.5ml

说明书1


[需自备的设备及试剂]

405-425nm滤光片的酶标仪

 

[试剂盒的储存及有效期]

1. Reagent 1缓冲液溶液,  -20oC可保存6个月。              

2. Reagent 2ABTS原溶液, -20oC可保存6个月, 需避光保存。              

3. Reagent 3H2O2溶液-20oC避光可保存6个月。             

4. Reagent 4过氧化物酶溶液,-20oC避光可保存6个月。            

5. Reagent 510mM Trolox溶液, -20oC可保存6个月, 需避光保存。   

               

[试剂准备]

1. 试剂3溶液配制:将双蒸馏水(DWW)稀释至原来体积的1000倍。

2. ABTS溶液制备:混合试剂1、试剂23溶液比例为76:5:4,按需求量配置ABTS溶液。ABTS溶液应在没有光照的室温下保存,在30分钟内使用。

3. 试剂4溶液制备:用试剂1稀释试剂4至其原始体积的10倍。试剂4溶液应在使用前按所需量配制。

 

[标本处理]

1. 血浆/血浆等液体样本              

预处理:直接检测。注意,制备血浆样品,不推荐使用EDTA作为凝剂。         

     

2. 组织样本              

预处理:准确称量样品,按比例加入生理盐水,如1g样品加入9g生理盐水。在冰上匀浆于4oC,12000 rpm/min 离心5min ,取上清液用于实验。              

 

3. 细胞              

预处理:收集不少于100万个细胞,加入200μL冷磷酸盐缓冲液。通过均或超声处理破细胞,4℃、12000 rpm/min离心5min,取上清液用于实验              

注意:对于组织样本和细胞,需检测总蛋白浓度。建议使用IS003 BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白质浓度。

 

[操作步骤]

操作表


空白

标准

样本

双蒸水(μl

10

Trolox 溶液 (μl


10

样本 (μl)



10

试剂4溶液 (μl)

202020

ABTS 溶液 (μl)

170170170
室温反应6分钟,在414nm波长测量各孔O.D.值。

注:建议用双蒸水Trolox 溶液稀释至0.15、0.3、0.6、0.9、1.2和1.5mM,绘制标准曲线。

 

[实验原理]

ABTS在适当的氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS·+,在抗氧化物存在时,ABTS·+的产生会被抑制,在 405nm或 734nm测定ABTS·+的吸光度即可测定并计算出样品的总抗氧化能力。Trolox是一种VE的类似物,具有和VE相近的抗氧化能力,用作其它抗氧化物总抗氧化能力的参考。例如,Trolox的总抗氧化能力为 1,相同浓度情况下,其它物质的抗氧化能力用其抗氧化能力和Trolox相比的倍数来表示。

 

[下载]

MSDA

 



  • Total Antioxidant Capacity Assay Kit(A015-2)
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