一氧化氮测定试剂盒 (A013-2)

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

[预期应用]

本试剂盒可测血清、血浆、组织样本和其它生物液体中N0含量

一氧化氮NO (即血管内皮舒张因子),在生物体内作为种反应性极强的自由基,兼有第二信使和神经递质作用,同时又是一种效应分子,在体内县有广泛的生理作用,如松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集、调节脑血流、介导细胞毒效应和免疫调节、参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。NO产生异常与某些疾病的发生发展有着密切关系。因此,近年来对NO的研究越来越受到广大科学工作者的重视。

 

[试剂盒内容]


试剂

数量(96T)

试剂数量(96T)

Reagent 1

1×20ml

Reagent 5

1×3ml

Reagent 2

1×10ml

2mmol/L Sodium nitrite 标准品

1×1ml

Reagent 3

1×10ml

说明书

1

Reagent 4

1×3ml



测定前双蒸馏水2mmol/L标准溶液稀释至20μmol/L。 


[试剂盒的储存及有效期]

1. Reagent 14oC可保存6个月。              

1. Reagent 24oC可保存6个月。              

2. Reagent 34oC避光可保存6个月。             

3. Reagent 44oC避光可保存6个月。            

4. Reagent 54oC保存6个月。              

5. 2mmol/LSodium nitrite标准4oC保存6个月


[试剂准备]

1. 显影剂:R3:R4:R5= 2.5:1:1,临用前制备,在4oC存储,当颜色加深时不能使用。

2. 标准:用蒸馏水稀释2 mmol/L亚硝酸钠标准,分别为1:39、1:79、1:99、1:159、1:319、1:639,制备0.05mmol/L、0.025mmol/L、0.02mmol/L、0.0125mmol/L、0.00 625mmol/L、0.00 3125mmol/L标准溶液。

 

[标本处理]

1. 血清

取血清直接用于实验。

2. 组织样本

动物组织:取适量组织样本,称重,按比例加入生理盐水制备组织匀浆(质量体积比=1:9,例如900μl生理盐水中加入100μg组织),2500~3000 0rp/min离心10分钟,取上清液用于实验

植物组织:取适量组织样本,称重,按比例加入 0.1mol/L PBS(pH7~7.4)制备组织匀浆(质量体积比=1:9,例如900μl0.1mol/L PBS( pH7~7.4)中加入100μg组织),4000rpm/min离心10分钟,取上清液用于实验。

细胞样本:用六孔板培养细胞,若要测定细胞培养上清中的总蛋白含量,则应直接检测;若要确定细胞的总蛋白含量,则用胰蛋白酶消化细胞(或直接刮取细胞),收集细胞和液体于试管内,1000~3000 rpm/min离心5分钟,弃上清液。在沉淀中加入1ml生理盐水,混匀(洗脱胰蛋白酶原和培养液),1000~3000 rpm/min 离心5分钟,弃上清液并保存沉淀细胞,加入0.2~0.3mL生理盐水制备匀浆液(有以下4种匀浆方法):a. 细胞裂解液;b. 超声处理;c. 摇晃; d玻璃匀浆器,每次研磨5~10秒,研磨3~4次,每次间隔20秒,取匀浆用于实验。

注:取样前摇匀。

 

[操作步骤]

1. 标准品预处理

用蒸馏水稀释2 mmol/L Sodium nitrite 标准,稀释倍数分别为1:39、1:79、1:99、1:159、1:319、1:639,制备0.05mmol/L、0.025mmol/L、0.02mmol/L、0.0125mmol/L、0.00625mmol/L、0.003125mmol/L标准溶液。

 

2. 样本预处理

血清(血浆):

100μl 血清(血浆) 加200μl Reagent 1 , 混匀,加100μl Reagent 2,漩涡充分混匀后静置10分钟,3500~4000rpm/min离心15分钟,取上清液160μl 用于实验

组织匀浆:取300μl 10%匀浆上清液,加200μl Reagent 1 , 混匀,加100μl Reagent 2, 漩涡充分混匀后静置10分钟,3500~4000rpm/min离心15分钟,取上清液160μl 用于实验

 

3. 操作表


空白管标准管样本管
双蒸水 (ml)0.16

2 mmol/L Sodium nitrite 标准品(ml)
0.16
上清液(ml)

0.16
显影剂(ml)0.080.080.08
混匀,静置15min,在550nm波长测量各孔O.D.值。


[实验原理]

NO本身半衰期极短,血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以亚硝酸盐及硝酸盐的形式存在,通过其浓度可以间接测定NO浓度。

 

[说明]

1. 严格按照说明书进行操作

2. 清液需澄清,若混浊,建议再次离心。

3. 血清样本出现溶血和浑浊会影响结果。

4. 血液和组织在4~5℃保存3天,温度越低,保存时间越长。在-20℃下可保存1~2个月。

5. 请参考血清(血浆)检测培养液并计算。

6. 细胞培养上清样本测算请参考血清血浆样本。

 

[下载]

MSDA

  • Nitric Oxide Assay Kit (A013-2)
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