一氧化氮(NO)测定试剂盒 (A012)

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

[预期应用]

本试剂盒运用硝酸还原法定量测定血清、胃液、尿液、细胞培养上清或其它相关生物液体中一氧化氮(NO)含量。

[试剂盒内容]

试剂名称数量(50/25T)试剂名称数量(50/25T)

Reagent 1

2×6ml/1×6ml

Reagent 6

1/1

Reagent 2

2×6ml/1×6ml

Reagent 7

1×8mL//1×4ml

Reagent 3

1×12ml//1×6ml

Standard(10mmol/L

1×0.5ml/1×0.5ml

Reagent 4

1×6ml//1×3ml

Attachment

2×40ml/1×40ml

Reagent 5

1/1

Instruction manual

1/1

Note:Attachment 是双蒸水.


[需自备的设备及试剂]

1、分光光度计(比色测定波长为550nm),0.5厘米光路玻璃试管              

2、恒温水浴箱或恒温箱(孵育温度:37℃和90~100℃)              

3、台式离心机              

4、微量移液器及吸头            

5、漩涡混合仪   ,玻璃棒              

6、蒸馏水或去离子水


[试剂盒的储存及有效期]

1、试剂1:-20℃或低于-20℃可保存3个月。使用前将试剂置于37℃或室温下充分溶解。              

2、试剂2:-20℃或低于-20℃可保存3个月。使用前将试剂置于37℃或室温下充分溶解。              

3、试剂3:室温保存6个月。             

4、试剂4:室温保存6个月。              

5、试剂5:避光保存。              

6、试剂6:避光冷藏保存。如果颜色变成深褐色,则不能使用。              

7、试剂7:室温保存6个月。              

8、10mmol/L标准:-20℃或低于-20℃可保存6个月。 


[试剂准备]

1、混合试剂制备:混合试剂1和试剂2的比例为1:1,根据实验需求量配置。完全混合后,需在24小时内使用。

2、试剂5:粉末×1瓶,使用时,加入20ml(50T)或10ml×(25T)90OC~100℃热蒸馏水完全溶解后,避光储存。试剂5为过饱和溶液,最好加入23ml(50T)/11.5ml(25T)热蒸馏水(考虑热膨胀),同时水浴加热,并用玻璃棒搅拌,使其完全溶解。配好的试剂5存放时可能会出现晶体,使用前请加热并搅拌,使其完全溶解。

3、试剂6:粉末×1瓶,使用时加入8ml(50T)或4ml(25T)双蒸馏水溶解。避光冷藏。如果颜色变成深褐色,请不要使用。

4。显色剂:根据实验需求量配置(配置好的显色剂,可在1个月内使用)。试剂5、试剂6和试剂7的混合比例为2.5:1:1。可存放在40ml干净的方形瓶中,避光。低温存放可能会出现晶体。再次使用时,100℃水浴加热,反复摇动使其完全溶解。

5。100μmol/L标准工作液配制:取0.1ml标准品,加入双蒸馏水,直至体积达到10ml(100倍稀释),充分混合,浓度为100μmol/L标准工作液。准备后需立即使用。


[标本处理]

1、液体样品(如血清、胃液、尿液、细胞培养上清和其他生物液体等)NO测定:

预处理:根据实验方法。

2、组织样品NO测定

预处理:根据实验方法。


[操作步骤]

1、液体样品NO测定

操作表:


空白

标准品

样本

双蒸水 (ml

0.1

100μmol/L 标准品工作液 (ml)


0.1

液体样本 (ml)



0.1

混合试剂 (ml)

0.40.40.4
充分搅拌,在37℃水浴中孵育60分钟。

试剂 3 (ml)

0.20.20.2

试剂 4 (ml)

0.10.10.1
用漩涡混合仪充分搅拌30秒钟,放置40分钟,3500~4000转离心10分钟,取上清液进行显色反应。

上清 (ml)

0.50.50.5
?

显色液(ml

0.60.60.6
充分搅拌,放置10分钟,吸取反应液于比色皿(0.5cm)中,在550nm下测量OD值(用蒸馏水调零)。

说明:

a、如果在冬天完成试验,请在37℃预热所有试剂5分钟。

b、如果上清液不足,请延长离心时间或减少上清取样量(例如0.4ml或0.45ml),确保所有试管上样体积一致,试管中不要有沉淀物。


2、组织样品NO测定

操作表:


空白

标准品

样本

双蒸水 (ml

0.50.4

100μmol/L 标准品工作液 (ml)


0.1


匀浆  (ml)



0.5

混合试剂 (ml)

0.40.40.4
充分搅拌,在37℃水浴中孵育60分钟。

试剂 3 (ml)

0.20.20.2

试剂 4 (ml)

0.10.10.1
用漩涡混合仪充分搅拌30秒钟,放置40分钟,3500~4000转离心10分钟,取上清液进行显色反应。

上清 (ml)

0.80.80.8
?

显色液(ml

0.60.60.6
充分搅拌,放置10分钟,吸取反应液于比色皿(0.5cm)中,在550nm下测量OD值(用蒸馏水调零)。

说明:

a、如果在冬天完成试验,请在37℃预热所有试剂5分钟。

b、如果上清液不足,请延长离心时间或减少上清取样量(例如0.4ml或0.45ml),确保所有试管上样体积一致,试管中不要有沉淀物。


[实验原理]

NO化学性质非常活泼,易转化为硝酸盐(NO3-)和亚硝酸盐(NO2-),NO2-也可转化为NO3-。本试剂盒采用硝酸还原酶特异地将NO3-还原成NO2-,通过测定OD值计算NO含量。

[样本值]

1、推荐采样量:

牛血清:300μL

绵羊血清:300μL

大鼠和小鼠血清:100μL

兔血清:100μL

10%组织匀浆:500μl

细胞裂解液:500μL

细胞培养上清液:100μL


2、正常NO含量:

样本

样本量(仅供参考)

NO含量(仅供参考)

大鼠血清

100μl

38.0±23.4μmol/L

小鼠血清

100μl

49.96±23.76μmol/L

兔血清

100μl

99.16±39.5μmol/

狗血清

100μl

89.51±32.13μmol/L

[说明]

1、试剂1、试剂2和标准需避免反复冻融。如果要分次实验(>3次),那么请将试剂1、试剂2和标准分装储存,根据每次实验的使用量分装及配置试剂。制备好的显色剂需避光。

2、样本不立即用于实验(如血清、血浆、组织等),可置于-70℃或低于-70℃保存。冻存样品可在半年内使用。

3、所有试剂配制和空白管需使用不含NO2-的双蒸水或三蒸水(试剂盒有双蒸馏水)。

4、完成反应和离心后,取上清时避免吸入沉积物,否则OD值会大幅度增高,严重干扰结果的有效性。

5、试管选择:

a、建议使用一次性塑料试管。

b、若要使用玻璃试管,请将其浸泡在洗涤剂溶液中超过半小时,煮沸0.5~1小时,小心刷洗,用自来水冲洗15~20次,弃水,用蒸馏水冲洗1~2次,烘干后使用。


[下载]

MSDS


  • Nitric Oxide (NO)Assay Kit (A012)
图片展示
  • Certificate
通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证
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